研究級的分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室普及率高的一種光譜儀器，由于靈敏度高、選擇性好、準(zhǔn)確度高、適用濃度范圍廣，長期在分析領(lǐng)域扮演很重要的角色。

 

　　紫外光譜通常是以吸收曲線的形式表示?？v坐標(biāo)為吸收強(qiáng)度（ε）用lgε表示，也有用吸光度（A）或透光率T表示。橫坐標(biāo)多用波長（λ）表示，單位為nm。當(dāng)化合物的大吸收在某波長位置時(shí)，則波長用λmax表示。對于同一物質(zhì)，濃度不同時(shí)，各波長處的吸光度值不一樣。但吸收曲線相似，大吸收波長不變。

 

　　研究級的分光光度計(jì)用來測量待測物質(zhì)對可見光或紫外光（200～760nm）的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器。可以測定核酸和蛋白的濃度，也可以測定細(xì)菌細(xì)胞密度，紫外分光光度計(jì)又可分為單光束，假雙光束，雙光束。它們的用途又有區(qū)別。

 

　　單光束：適于在給定波長處測量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測器具有很高的穩(wěn)定性。

 

　　雙光束：自動(dòng)記錄，快速全波段掃描。可消除光源不穩(wěn)定、檢測器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。

 

　　假雙光束也就是比例雙光束，它的原理是由同一單色器發(fā)出的光被分成兩束，一束直接到達(dá)檢測器，另一束通過樣品后到達(dá)另一個(gè)檢測器。這種儀器的優(yōu)點(diǎn)是可以監(jiān)測光源變化帶來的誤差，但是并不能消除參比造成的影響。

 

　　定量分析條件的選擇：

 

　　1、測量波長的選擇：一般選用待測物質(zhì)的大吸收波長作為測量波長（入射光）；但當(dāng)在大吸收波長處有干擾時(shí)，則應(yīng)根據(jù)“吸收大干擾小”的原則來選擇波長。

 

　　2、控制適當(dāng)?shù)奈舛确秶河蓽y量誤差可知，當(dāng)吸光度在0.2～0.8之間時(shí)，測量誤差小，所以應(yīng)盡量控制吸光度在此范圍進(jìn)行測定。控制的方法為：控制溶液的濃度；選用適當(dāng)厚度的比色皿。